MCRN56 超微量RNA快速提取试剂盒(With DNase I)
Details
试剂盒组成、储存、稳定性
试剂盒组成 | 保存 | 50次(MCRN56) |
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裂解液RLT |
室温 |
20ml |
去蛋白液RW1 |
室温 |
40ml |
漂洗液RW | 室温 | 10ml(第一次使用前加入无水乙醇) |
PLANTaid | 室温 | 50ml |
RNase-freeH2O | 室温 | 10ml |
DNase Buffer | -20°C | 1.25 ml |
RNase free DNase I | -20°C | 100 μl |
RNase-free微量RNA离心柱和收集管 | 室温 | 50套 |
产品信息
产品介绍 | 本品为超微量RNA提取的专用试剂盒。适用于从超微量的细胞、组织、昆虫、植物、细菌等样品中提取总RNA。处理范围一般为细胞(1-106)或者组织(<5mg)。配有DNA酶柱上消化试剂,得到的RNA无DNA残留,可直接用于下游荧光定量PCR或者高通量测序等试验。 |
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产品特点 |
1.特殊无垫圈离心柱设计确保离心后无液体残留和污染。保证了回收DNA高纯度。 2.特殊微量10μg离心柱设计可以最低6μl洗脱,保证了提取RNA的高浓度。 3.添加的独有的植物RNA助提剂PLANTaid可以清除植物多糖多酚或者昆虫的糖原,几丁质多糖等杂质,提高富含杂质的昆虫和植物RNA的提取质量。 4.完全不使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。 |
储存事项 |
1.不合适的储存于低温(4°C或者-20°C)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15°C-25°C)进行。 2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。 |
注意事项 |
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机。 2.部分含多糖多酚、几丁质多糖或者次级代谢产物丰富的昆虫样品,或者植物样品,提取效果不佳(如降解、产量低)可以尝试在裂解液RLT中添加PLANTaid后提取。具体添加比例为10体积(1ml)RLT:1体积(100μl)PLANTaid。 3.关于DNA酶柱上消化的使用: |
操作步骤 |
第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇! 整个操作步骤是由3个步骤组成(所有步骤室温操作):(一)样品裂解匀浆(二)样品清理(三) 样品纯化(一) 样品裂解匀浆 (二)样品清理 此步骤为可选步骤,主要是针对动植物组织和细胞,对于样品量很低(细胞数≤105))或者匀浆后能充分裂解均一的样品无需此步骤。若研磨匀浆后不溶物碎片太多,可将匀浆后裂解物13,000rpm离心1分钟沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物。将上清液转移到新的1.5ml离心管内。 (三)样品纯化 1.加入等体积(95-100%)的无水乙醇到上一步的裂解物上清中吹打混匀。 |
附录1:DNA酶柱上消化(详细请参考MCRN34 DNase I 柱上消化试剂盒说明书)
1.按照前面所列RN56试剂盒操作步骤操作,直到做完样品纯化的操作步骤2。
2.取20μlDNase I buffer和2μlRNase free DNase I在离心管轻轻吹打混匀成工作液(处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液)。
3.向离心柱中加入350μl去蛋白液RW1,12,000 rpm 离心30 秒,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
4.向离心柱的膜中央加入前面准备的22μl的DNase I 工作液,室温(20°C-30°C)放置15分钟。注意直接将工作液滴在膜中央上充分浸润膜,不要让工作液滴在离心柱管壁上挂壁不能充分和膜接触。
5.向离心柱中加入350μl去蛋白液RW1,12,000 rpm 离心30秒,弃废液,将离心柱放回收集管中。
6.接操作步骤4完成后续步骤。