MCRN46 血清/血浆microRNA快速提取试剂盒
Details
试剂盒组成、储存、稳定性
试剂盒组成 | 保存 | 50次(NCRN4601) |
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Lysis buffer |
4°C 避光 |
50ml |
WashSolution1 |
室温 |
12ml(第一次使用前加入28ml无水乙醇) |
WashSolution2/3 | 室温 | 10ml(第一次使用前加入42ml无水乙醇) |
RNase-freeH2O | 室温 | 10ml |
RNase-free吸附柱RA和收集管 | 室温 | 50套 |
产品信息
产品介绍 |
近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15-30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和异丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA,对于血清血浆样本更是由于其自身特点更难提取。 本试剂盒采用独特的裂解液迅速直接裂解血清血浆RNA酶,强烈有机抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA在高浓度乙醇下吸附于离心柱内特殊硅基质膜, 再通过一系列特殊漂洗液快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质进一步去除, 最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 |
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产品特点 |
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。 2.也不需要乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。 3.特殊的裂解液配方,可以处理更多的血清/血浆样品。 4.多次柱漂洗确保高纯度,可用于RNAi,RT-PCR,Northern-blot和各种实验。 |
储存事项 |
1.所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37°C水浴加热几分钟,即可恢复澄清。 2.不合适的储存于低温(4°C或者-20°C)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15°C-25°C)进行。 3.WashSolution2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体,并不影响使用,直接不吸晶体,吸上清使用就可以。 4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。 |
产品特点 |
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。 2.也不需要异丙醇或者乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。 3.特殊的裂解液配方,可以处理更多的血清/血浆样品。 4.多次柱漂洗确保高纯度,可用于RNAi,RT-PCR,Northern-blot和各种实验。 |
注意事项 |
1.第一次使用前请先在WashSolution1瓶和WashSolution2/3瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 2.除说明外,所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf5415C或者类似离心机。 3.需要自备乙醇,氯仿。 4.Lysisbuffer和WashSolution1含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 |
操作步骤 |
提示:第一次使用前请先在WashSolution1瓶和WashSolution2/3瓶中加入指定量乙醇! 2.将样品剧烈震荡混匀,在15-30°C条件下孵育5分钟。 3.每750μlLysisbuffer加200μl氯仿,剧烈振荡15秒并室温下放置2分钟。 4.于4°C12,000rpm离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加Lysisbuffer体积的70%。 5.小心取上清(精确计算体积)转入到新的离心管,加入1.5倍体积的无水乙醇(必须是室温的),涡旋混匀。此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心,立刻接下步。 6.将混合物(每次小于700μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm离心30-60秒,弃掉废液。 7.加700μlWashSolution1(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心30秒,弃掉废液。 8.加入500μlWashSolution2/3(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心30秒,弃掉废液。加入500μlWashSolution2/3,重复一遍。 9.将吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 10.取出吸附柱RA,放入一个RNasefree离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-40μlRNasefreewater(事先在100°C水浴中预热效果更好),室温放置1分钟,12,000rpm离心1分钟。洗脱液加回到吸附柱重复洗脱一遍可以提高产量和浓度(如果需要RNA浓度高)。如果需要提高浓度,洗脱体积最小可以低至15μl,但是使用小体积洗脱会降低一些产量。 |