MCRN56 超微量RNA快速提取试剂盒（With DNase I）

室温

室温

1.特殊无垫圈离心柱设计确保离心后无液体残留和污染。保证了回收DNA高纯度。

2.特殊微量10μg离心柱设计可以最低6μl洗脱，保证了提取RNA的高浓度。

3.添加的独有的植物RNA助提剂PLANTaid可以清除植物多糖多酚或者昆虫的糖原，几丁质多糖等杂质，提高富含杂质的昆虫和植物RNA的提取质量。

4.完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

1.不合适的储存于低温（4°C或者－20°C）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15°C－25°C）进行。

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机。

2.部分含多糖多酚、几丁质多糖或者次级代谢产物丰富的昆虫样品，或者植物样品，提取效果不佳（如降解、产量低）可以尝试在裂解液RLT中添加PLANTaid后提取。具体添加比例为10体积（1ml）RLT：1体积（100μl）PLANTaid。

3.关于DNA酶柱上消化的使用：
1)普通RT-PCR：可以省略DNA酶柱上消化步骤。
2)荧光定量RT-qPCR：
（A）可以加上DNA酶柱上消化步骤。下游采用不加基因组清除步骤的反转录试剂盒即可（MCPC58）。
（B）可以省略DNA酶柱上消化步骤。但是下游建议采用带基因组清除的反转录试剂盒即可（MCPC54）。
3)高通量测序/转录组测序：要求特别高的下游实验必须做DNA酶柱上消化步骤，或者按照高通量测序公司的要求进行。

第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇!

整个操作步骤是由3个步骤组成（所有步骤室温操作）：（一）样品裂解匀浆（二）样品清理（三）

样品纯化（一）

样品裂解匀浆
a.   组织：5mg以内的组织加300μl的裂解液RLT后匀浆。。注：PLANTaid是提取多糖多酚次级代谢产物色素含量丰富的困难样品不可缺少成分。
b.   贴壁细胞：去除液体培养基后，直接往培养板中加入裂解液RLT溶解细胞，并用移液枪反复吹打充分裂解混匀。依据细胞的数量来决定所需的裂解液RLT（105细胞以内加100μl，106细胞以内加300μl）。
c. 悬浮细胞：离心沉淀细胞(≤500  x  g)，完全去除上清后用裂解液RLT重悬细胞沉淀。可短暂涡旋振荡。
d.   其它组织：其他难裂解的组织，细菌，酵母，植物匀浆需配合高速珠磨均质仪器和适合裂解珠（玻璃珠，钢珠，锆珠等）。

（二）样品清理

此步骤为可选步骤，主要是针对动植物组织和细胞，对于样品量很低（细胞数≤105）)或者匀浆后能充分裂解均一的样品无需此步骤。若研磨匀浆后不溶物碎片太多，可将匀浆后裂解物13，000rpm离心1分钟沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物。将上清液转移到新的1.5ml离心管内。

（三）样品纯化

1.加入等体积(95-100%)的无水乙醇到上一步的裂解物上清中吹打混匀。
2.将混合物加入一个微量RNA离心柱中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm离心30 秒，弃掉废液。
3.加700μl 去蛋白液RW1，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
4.加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000  rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl漂洗液RW，重复一遍。
5.将离心柱放回空收集管中，12,000  rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
6.取出离心柱，放入一个干净1.5ml离心管中，在吸附膜的中间部位加15μl RNase free water（事先在70-90°C水浴中加热可提高产量），室温放置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。减少洗脱液体积可以提高RNA浓度，但是最低洗脱液体积不应少于6μl。